1、樣品制備準(zhǔn)備

 

　　首先需要將待測(cè)樣品制備好，保證樣品的濃度在一個(gè)較小的范圍內(nèi)，通常在0.1到2.0之間。如果濃度太高，會(huì)使吸光度超過(guò)儀器的檢測(cè)范圍；如果濃度太低，會(huì)使誤差增大。

 

　　2、準(zhǔn)備空白參照

 

　　為了減少誤差，在進(jìn)行樣品分析之前，需要準(zhǔn)備一個(gè)空白參照，相當(dāng)于沒(méi)有待測(cè)物質(zhì)的樣品。空白參照通常是已知化學(xué)成分的溶液，或者僅由溶劑組成的溶液。空白參照的吸光度將作為零點(diǎn)進(jìn)行校準(zhǔn)和參考。

 

　　3、確定波長(zhǎng)和機(jī)器零點(diǎn)

 

　　選擇與待測(cè)物質(zhì)輕微吸收波長(zhǎng)相同的波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)，最好選擇在樣品吸收峰值附近的波長(zhǎng)，以獲得最佳的測(cè)量精度。另外，在進(jìn)行測(cè)量之前，還需要確定儀器的零點(diǎn)。

 

　　4、在分光光度計(jì)中放入樣品和參照溶液

 

　　通常，會(huì)在分光光度計(jì)中放置兩個(gè)試管，一個(gè)是裝有待測(cè)樣品的試管，另一個(gè)是裝有空白參照的試管。這些試管需要與儀器中的光路進(jìn)行對(duì)齊。

 

　　5、讀取數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果

 

　　一旦樣品和空白參照均被放入儀器中，就可以開(kāi)始讀取數(shù)據(jù)并計(jì)算結(jié)果。分光光度計(jì)可以自動(dòng)讀取并記錄兩個(gè)試管中的吸光度值，并計(jì)算它們之間的差異，其差值就是分析物質(zhì)的濃度。計(jì)算公式為A=εbc，式中A表示吸光度，ε是當(dāng)物質(zhì)的摩爾吸收系數(shù)，b是樣品的路徑長(zhǎng)度（即光路長(zhǎng)度），c是樣品溶液的濃度。

 

　　在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析時(shí)，需要考慮到各種可能的誤差源，如波長(zhǎng)漂移、噪聲、路徑長(zhǎng)度等。為了減少誤差，應(yīng)進(jìn)行儀器校準(zhǔn)和使用最佳的樣品濃度。在具體實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，記錄所有的細(xì)節(jié)，并進(jìn)行多次實(shí)驗(yàn)以確定結(jié)果的準(zhǔn)確性。